Unu el la ĉefaj avantaĝoj de ĉelkulturo estas la kapablo manipuli la fizikan kemion de ĉela reproduktado (t.e. temperaturo, pH, osmoza premo, O2 kaj CO2 streĉiĝo) kaj fiziologia medio (t.e. hormona kaj nutra koncentriĝo).Krom temperaturo, la kultura medio estas regata de la kreskmedio.
Kvankam la fiziologia medio de kulturo ne estas same klara kiel ĝia fizika kaj kemia medio, pli bona kompreno de serumkomponentoj, identigo de kreskfaktoroj necesaj por proliferado, kaj pli bona kompreno de la mikromedio de ĉeloj en kulturo.(T.e. ĉel-ĉela interago, gas-disvastigo, interago kun la matrico) nun permesas al certaj ĉellinioj esti kultivitaj en serum-libera amaskomunikilaro.
1.Kultura medio influas ĉelan kreskon
Bonvolu noti, ke la ĉelkulturkondiĉoj estas malsamaj por ĉiu ĉeltipo.
La sekvoj de deviado de la kulturkondiĉoj necesaj por speciala ĉeltipo intervalas de la esprimo de nenormalaj fenotipoj ĝis la kompleta fiasko de ĉelkulturo.Tial ni rekomendas, ke vi familiariĝu kun la ĉela linio, pri kiu vi interesiĝas, kaj strikte sekvu la instrukciojn provizitajn por ĉiu produkto, kiun vi uzas en via eksperimento.
2. Singardecoj por krei optimumigitan ĉelkulturan medion por viaj ĉeloj:
Kulturmedio kaj serumo (vidu malsupre por pliaj informoj)
pH kaj CO2-niveloj (vidu sube por pliaj informoj)
Kultivi plaston (vidu sube por pliaj informoj)
Temperaturo (vidu sube por pliaj informoj)
2.1 Kultura Amaskomunikilaro kaj Serumo
La kulturmedio estas la plej grava parto de la kulturmedio, ĉar ĝi disponigas la nutraĵojn, kreskfaktorojn kaj hormonojn necesajn por ĉelkresko, kaj reguligas la pH kaj osmozan premon de la kulturo.
Kvankam la komencaj ĉelkultureksperimentoj estis faritaj uzante naturajn amaskomunikilarojn akiritajn de histoeltiraĵoj kaj korpaj fluidoj, la bezono de normigado, amaskomunikila kvalito kaj pliigita postulo kaŭzis la evoluon de definitivaj amaskomunikiloj.La tri bazaj specoj de amaskomunikiloj estas bazaj amaskomunikiloj, reduktitaj serummedioj kaj serum-liberaj amaskomunikiloj, kaj ili havas malsamajn postulojn por serumuplemento.
2.1.1 Baza medio
Gibco ĉelkulturmedio
La plej multaj ĉellinioj kreskas bone en bazaj amaskomunikiloj enhavantaj aminoacidojn, vitaminojn, neorganikajn salojn kaj karbonfontojn (kiel ekzemple glukozo), sed ĉi tiuj bazaj amaskomunikiloj devas esti kompletigitaj per serumo.
2.1.2 Reduktita serummedio
Botelo kun Gibco Low Serum Medium
Alia strategio por redukti la malutilojn de serumo en ĉelkultureksperimentoj estas uzi serum-reduktitan amaskomunikilaron.Reduktita serummedio estas baza meza formulo riĉa je nutraĵoj kaj best-devenaj faktoroj, kiuj povas redukti la bezonatan kvanton da serumo.
2.1.3 Serum-libera medio
Botelo kun Gibco-serum-libera medio
Serum-libera medio (SFM) evitas la uzon de besta serumo anstataŭigante serumon kun taŭga nutrado kaj hormonaj formulaĵoj.Multaj primaraj kulturoj kaj ĉellinioj havas serum-liberajn mezajn formuliĝojn, inkluzive de la ĉina Hamster Ovary (CHO) rekombina proteina produktadlinio, diversaj hibridomaj ĉellinioj, insektlinioj Sf9 kaj Sf21 (Spodoptera frugiperda), same kiel por La gastiganto por virusproduktado. (ekzemple, 293, VERO, MDCK, MDBK), ktp. Unu el la ĉefaj avantaĝoj de uzado de serum-libera medio estas la kapablo fari la medion selektema por specifaj ĉeltipoj elektante taŭgan kombinaĵon de kreskfaktoroj.La sekva tabelo listigas la avantaĝojn kaj malavantaĝojn de serum-libera amaskomunikilaro.
Avantaĝo
Pliigi klarecon
Pli konsekvenca agado
Pli facila purigado kaj kontraŭflua prilaborado
Precize taksu ĉelan funkcion
Pliigi produktivecon
Pli bona kontrolo de fiziologiaj reagoj
Plifortigita ĉela amaskomunikila detekto
Malavantaĝo
Ĉeltipaj specifaj mezaj formulpostuloj
Bezonas pli altan purecon de reakciilo
Malrapidiĝo en kresko
2.2.1 pH-nivelo
La plej multaj normalaj mamulaj ĉellinioj kreskas bone ĉe pH 7.4, kaj la diferencoj inter malsamaj ĉellinioj estas malgrandaj.Tamen, kelkaj transformitaj ĉellinioj pruviĝis pli bone kreski en iomete acida medio (pH 7.0 - 7.4), dum kelkaj normalaj fibroblastaj ĉellinioj preferas iomete alkalan medion (pH 7.4 - 7.7).Insektaj ĉellinioj kiel ekzemple Sf9 kaj Sf21 kreskas plej bone ĉe pH 6.2.
2.2.2 CO2-nivelo
La kreskmedio kontrolas la pH de la kulturo kaj bufras la ĉelojn en la kulturo por rezisti ŝanĝojn en pH.Kutime, ĉi tiu bufrado estas atingita per enhavado de organikaj (ekzemple, HEPES) aŭ CO2-bikarbonat-bazitaj bufroj.Ĉar la pH de la medio dependas de la delikata ekvilibro de solvita karbondioksido (CO2) kaj bikarbonato (HCO3-), ŝanĝoj en atmosfera CO2 ŝanĝos la pH de la medio.Sekve, kiam oni uzas medion bufritan kun CO2-bikarbonat-bazita bufro, estas necese uzi eksogenan CO2, precipe dum kulturado de ĉeloj en malfermaj kulturpladoj aŭ kulturado de transformitaj ĉellinioj ĉe altaj koncentriĝoj.Kvankam plej multaj esploristoj kutime uzas 5-7% CO2 en la aero, la plej multaj ĉelkulturaj eksperimentoj kutime uzas 4-10% CO2.Tamen, ĉiu medio havas rekomenditan CO2 streĉiĝon kaj bikarbonatan koncentriĝon por atingi la ĝustan pH kaj osmozan premon;por pliaj informoj, bonvolu raporti al la instrukcioj de la meza fabrikanto.
2.3 Kultivado de plastoj
Ĉelkulturaj plastoj estas haveblaj en diversaj formoj, grandecoj kaj surfacoj por konveni diversajn ĉelkulturajn aplikojn.Uzu la ĉelkulturan plastan surfacgvidilon kaj ĉelkulturan ujon-gvidilon sube por helpi vin elekti la ĝustan plaston por via ĉelkultura aplikaĵo.
Rigardu ĉiujn plastojn de ĉelkulturo de Thermo Scientific Nunc (reklamligo)
2.4 Temperaturo
La optimuma temperaturo por ĉelkulturo dependas grandparte de la korpotemperaturo de la gastiganto de kiu la ĉeloj estas izolitaj, kaj en pli malgranda mezuro de la anatomiaj ŝanĝoj en temperaturo (ekzemple, haŭttemperaturo povas esti pli malalta ol tiu de skeletmuskolo. ).Por ĉelkulturo, Trovarmiĝo estas pli grava problemo ol trovarmiĝo.Tial, la temperaturo en la inkubatoro estas kutime fiksita iomete sub la optimuma temperaturo.
2.4.1 Optimuma temperaturo por diversaj ĉelaj linioj
La plej multaj homaj kaj mamulaj ĉellinioj estas konservitaj je 36 °C ĝis 37 °C por optimuma kresko.
Insektaj ĉeloj estas kultivitaj je 27 °C por optimuma kresko;ili kreskas pli malrapide ĉe pli malaltaj temperaturoj kaj temperaturoj inter 27°C kaj 30°C.Super 30 °C, la vigleco de insektaj ĉeloj malpliiĝas, eĉ se ĝi revenas al 27 °C, la ĉeloj ne resaniĝos.
Aviaj ĉellinioj bezonas 38,5 °C por atingi maksimuman kreskon.Kvankam ĉi tiuj ĉeloj povas esti konservitaj je 37 °C, ili kreskos pli malrapide.
Ĉellinioj derivitaj de malvarmsangaj bestoj (kiel ekzemple amfibioj, malvarmakvaj fiŝoj) povas toleri larĝan temperaturon de 15 °C ĝis 26 °C.
Afiŝtempo: Feb-01-2023