Poluado de ĉelkulturoj povas facile iĝi la plej ofta problemo en ĉelkulturlaboratorioj, foje kaŭzante tre gravajn sekvojn.Ĉelkulturaj poluaĵoj povas esti dividitaj en du kategoriojn, kemiajn poluaĵojn kiel medio, serumajn kaj akvomalpuraĵojn, endotoksinojn, plastigilojn kaj lesivojn, kaj biologiajn poluaĵojn kiel bakteriojn, ŝimojn, gistojn, virusojn, mikoplasmojn krucinfektojn.Poluita de aliaj ĉelaj linioj.Kvankam estas neeble tute forigi poluadon, ĝia ofteco kaj severeco povas esti reduktitaj per ĝisfunde komprenado de ĝia fonto kaj sekvante bonajn asepsiajn teknikojn.
1. Ĉi tiu sekcio skizas la ĉefajn specojn de biologia poluado:
Bakteria poluado
Muldo kaj virusa poluado
Mikoplasma poluado
Gisto poluado
1.1 Bakteria poluado
Bakterioj estas granda grupo de ĉieaj unuĉelaj mikroorganismoj.Ili kutime havas nur kelkajn mikronojn en diametro kaj povas veni en diversaj formoj, de sferoj ĝis bastonoj kaj spiraloj.Pro ilia ĉieeco, grandeco kaj rapida kreskorapideco, bakterioj, kune kun gistoj kaj ŝimoj, estas la plej oftaj biologiaj poluaĵoj en ĉelkulturo.
1.1.1 Detekto de Bakteria Poluado
Bakteria poluado estas facile detektita per vida inspektado de la kulturo ene de kelkaj tagoj post kiam ĝi infektiĝas;
Infektitaj kulturoj kutime aperas nubaj (t.e., malklaraj), foje kun maldika filmo sur la surfaco.
Subitaj gutoj en la pH de la kulturmedio ankaŭ estas ofte renkontitaj.
Sub malaltforta mikroskopo, la bakterioj aperas kiel etaj, movantaj grajnetoj inter la ĉeloj, kaj observado sub altforta mikroskopo povas solvi la formojn de individuaj bakterioj.
1.2 Poluado de muldiloj kaj virusoj
1.2.1 Mold Poluado
Ŝimoj estas eŭkariotaj mikroorganismoj de la funga regno, kiuj kreskas en formo de multĉelaj filamentoj nomataj hifoj.La konektivaj retoj de tiuj multĉelaj filamentoj enhavas genetike identajn nukleojn nomitajn kolonioj aŭ micelio.
Simila al gistpoluado, la pH de la kulturo restas stabila dum la komenca fazo de poluado kaj tiam pliiĝas rapide kiam la kulturo iĝas pli grave infektita kaj iĝas nuba.Sub la mikroskopo, micelio estas kutime filamentoza, foje kiel densaj aretoj de sporoj.La sporoj de multaj ŝimoj povas pluvivi en ekstreme severaj kaj malgastaj medioj dum sia neaktiva fazo kaj estas aktivigitaj nur kiam la ĝustaj kreskkondiĉoj estas renkontitaj.
1.2.2 Virus Poluado
Virusoj estas mikroskopaj infektaj agentoj kiuj transprenas la maŝinaron de la gastiga ĉelo por reproduktado.Ilia ekstreme eta grandeco malfaciligas ilin detekti en kulturo kaj forigi de reakciiloj uzitaj en ĉelkulturlaboratorioj.Ĉar la plej multaj virusoj havas tre striktajn postulojn por siaj gastigantoj, ili kutime ne negative influas ĉelkulturojn de specioj krom la gastiganto.
Tamen, la uzo de virus-infektitaj ĉelkulturoj povas prezenti gravan riskon al la sano de laboratoriopersonaro, precipe se homaj aŭ primataj ĉeloj estas kultivitaj en la laboratorio.
Virusinfekto en ĉelkulturoj povas esti detektita per elektrona mikroskopio, imunokolorigo kun aro de antikorpoj, ELISA, aŭ PCR kun konvenaj virusenkondukoj.
1.3 Mikoplasma poluado
Mikoplasmoj estas simplaj bakterioj sen ĉelaj muroj, kaj ili supozeble estas la plej malgrandaj mem-reproduktantaj organismoj.Pro ilia ekstreme malgranda grandeco (kutime malpli ol 1 mikrono), mikoplasmoj estas malfacile detekteblaj ĝis ili atingas ekstreme altajn densecojn kaj igas ĉelkulturojn plimalboniĝi;Ĝis tiam, kutime ne estas evidenta signo de infekto.
1.3.1 Detekto de mikoplasma poluado
Kelkaj malrapidkreskaj mikoplasmoj povas daŭri en kulturoj sen kaŭzado de ĉelmorto, sed ili ŝanĝas la konduton kaj metabolon de gastigaj ĉeloj en kulturoj.
Kronika mikoplasma infekto povas esti karakterizita per reduktita ĉela proliferadofteco, malpliigita saturiĝa denseco kaj aglutino en suspendkulturo.
Tamen, la nura fidinda maniero detekti mikoplasman poluadon estas testi la kulturon regule uzante fluoreskan makuladon (ekz., Hoechst 33258), ELISA, PCR, imunokolorigadon, aŭtoradiografion aŭ mikroban testadon.
1.4 Fermenta poluado
Gistoj estas unuĉelaj eŭkariotoj de la funga regno, kiuj iras en grandeco de kelkaj mikronoj (kutime) ĝis 40 mikronoj (malofte).
1.4.1 Detekto de gista poluado
Kiel ĉe bakteria poluado, kulturoj poluitaj per gisto povas fariĝi nubaj, precipe se la poluado estas en progresinta stadio.La pH de kulturoj poluitaj kun gisto ŝanĝiĝas tre malmulte ĝis la poluado iĝas pli severa, en kiu stadio la pH kutime pliiĝas.Sub la mikroskopo, gisto prezentiĝas kiel individuaj ovformaj aŭ sferaj partikloj kaj povas produkti pli malgrandajn partiklojn.
2.Kruca infekto
Kvankam ne same ofta kiel mikroba poluado, ampleksa krucpoluado de multaj ĉellinioj kun HeLa kaj aliaj rapide kreskantaj ĉellinioj estas klare difinita problemo kun gravaj sekvoj.Akiru ĉelliniojn de bonfamaj ĉelbankoj, regule kontrolu la karakterizaĵojn de la ĉellinioj, kaj uzu bonajn asepsajn teknikojn.Ĉi tiuj praktikoj helpos vin eviti kruc-poluadon.DNA-fingrospurado, kariotipado kaj izotipado povas konfirmi ĉu estas kruc-poluado en via ĉelkulturo.
Kvankam ne same ofta kiel mikroba poluado, ampleksa krucpoluado de multaj ĉellinioj kun HeLa kaj aliaj rapide kreskantaj ĉellinioj estas klare difinita problemo kun gravaj sekvoj.Akiru ĉelliniojn de bonfamaj ĉelbankoj, regule kontrolu la karakterizaĵojn de la ĉellinioj, kaj uzu bonajn asepsajn teknikojn.Ĉi tiuj praktikoj helpos vin eviti kruc-poluadon.DNA-fingrospurado, kariotipado kaj izotipado povas konfirmi ĉu estas kruc-poluado en via ĉelkulturo.
Afiŝtempo: Feb-01-2023